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TruSeq 接頭中*分子標識符的整合提高了定量測序的性
二代測序數據的定量分析要求區分重復讀長,重復讀長在PCR過程中由具有*起源的相同分子產生。通常PCR復制被定義為序列讀取,它以對齊為依據,對齊到相同的基因組坐標上。然而,在文庫構建期間,相同的分子能夠獨立產生。作為PCR的復制品,分析時這些分子的錯誤識別能夠產生不可預見的偏愛。美國紐約大學科學家開發了一種性價比高的序列接頭,通過改進Illumina公司TruSeq接頭,結合*分子標識符(UMI)的設計,可以維持進行多重、單一指標測序的能力。UMIs結合到TruSeq接頭(即TrUMIseq 接頭)能夠識別真正的PCR產物,這些PCR產物帶有相同UMIs作為相同的圖譜讀取。使用TrUMIseq 接頭,在使用DNA測序的各種人群中和使用RNA測序的基因表達定量中, PCR復制品的移除提高了等位基因頻率估計的度和RNA測序基因表達定量。
原文:
Jungeui Hong and David Gresham. Incorporation of unique molecular identifiers in TruSeq adapters improves the accuracy of quantitative sequencing. BioTechniques 63:221-226 (November 2017)