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介紹:
ELISA試劑盒在國內有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。
Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
特點:
1.高效、靈敏、特異的抗體。
2.穩定的重復性和可靠性。
3.吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體。
4.適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等多種標本類型。
5.節省實驗經費。
操作方法
1.標準品的稀釋,請按照說明書進行操作。
2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3. 加樣:不規范的移液操作可能帶來誤差。
1)空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗NE抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;
2)標準品孔:加入標準品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);
3)待測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗NE抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
7. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
8. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。
洗板方法
一、手工洗板方法:
甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。
二、自動洗板:
如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
注意事項
1.從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。
3.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
4.為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
5.不同批次試劑盒不能混用,如遇試劑不夠,請及時聯系客服解決
6.底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
7.中、英文說明書或許會有不一致之處,請以英文說明書為準。
8.保存溫度:2-8℃。
9.有效期:6個月(2-8℃)。