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從胰腺細胞中提取RNA具有一定的挑戰性,在這里,美國俄亥俄州立大學的科學家Robert Szulawski等提出一種可重復的方法,該方法可以從嚙齒動物幼體胰腺細胞中獲得充足的、高質量的RNA,用于體外表達研究。組織取自TLR3+/+和TLR3-/-的雌性非肥胖型糖尿病老鼠,該老鼠處于糖尿病前期階段。組織經液氮冷凍后切片,將組織切片固定在高濃度的酒精溶液中,并用含酒精的甲酚紫溶液染色,再水化作用使得固定切片zui小化。激光顯微切割系統Leica LMD6000 能夠從外形上識別胰腺細胞,并從組織中捕獲高濃度的胰腺RNA樣品。用胰腺cDNA進行探針法實時定量PCR檢測CXC趨化因子配體10,該配體是一種炎癥標記物可用于鑒定1型糖尿病。這一方法可作為顯微切割技術用于嚙齒動物胰腺細胞的典型代表,采用此方法只需要少量的組織便可進行表達研究,且不需要進行RNA的預擴增。利用非肥胖型糖尿病老鼠作為動物模型對于1型糖尿病的研究具有直接意義。
原文:
Robert Szulawski,Masato Nakazawa,Kelly D. McCall,Calvin B.L. James,and Frank L. Schwartz,Laser capture microdissection tailored to type 1 diabetes mellitus research,BioTechniques60: 293-298 (August 2016)