熒光定量服務都有哪些內容和要求?
點擊次數:2150 更新時間:2020-09-24
在PCR擴增中,添加了一對引物和特異性熒光探針。該探針是線性寡核苷酸,其兩端分別標記有熒光報告基團和熒光猝滅基團。探針完成后,報告基團發出的熒光信號被淬滅基團吸收,無法用PCR儀檢測到。在PCR擴增過程中(延伸階段),探針被Taq酶的5'-3'核酸外切酶活性消化并降解,從而使報告熒光團和淬滅熒光團分離,從而使熒光監測系統能夠接收到熒光。信號,即每個擴增的DNA鏈,都有一個熒光分子形成,從而使熒光信號的積累與PCR產物的形成*同步,這是
熒光定量服務的基礎。那么它服務的內容和要求是什么?
一、服務內容:
1、從動物細胞,人或動物組織中提取核酸;
2、分析核酸的濃度和純度;
3、熒光定量服務PCR檢測;
(1)引物和探針的設計與合成;
?。?)定量和相對定量的選擇;
?。?)探針法和染料法的選擇;
?。?)通過熒光定量PCR檢測目標基因;
?。?)數據統計分析;
4、實驗前服務:根據客戶提供的目標基因序列或NCBI序列號提供客戶引物和探針,并選擇引物和探針;
5、正式實驗服務:根據初步實驗中選擇的引物和探針,通過熒光定量PCR檢測樣品,并對結果進行統計分析。
二、熒光定量服務要求:
1、請提供盡可能多的新鮮材料(各種材料的RNA提取量請參考“總RNA提取”),或直接提供純化的總RNA(大于5ug/樣品);(有關各種材料的DNA提取量,請參閱“DNA提取”),或直接提供純化的DNA(大于5ug/樣品)。
2、請通過電子郵件提供已知的全長基因序列。
3、請提供盡可能詳細的背景信息:DNA/RNA來源,豐度等。