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什么是PCR擴增儀技術?
點擊次數:2348 更新時間:2017-10-23
   什么是PCR擴增儀技術?
  什么是PCR技術?是一種在體外擴增核酸的技術。PCR的基本反應包括以DNA為模板的反應和以mRNA為模板的反應。PCR技術是模擬體內天然DNA(脫氧核糖核酸)的復制過程。以擴增DNA為例,其基本原理是在模板、引物、4種dNTP和耐熱DNA聚合酶存在的條件下,特異擴增位于兩段已知序列之間的DNA區段的酶促合成反應。
  PCR擴增儀的工作原理:
  PCR反應一般設置20~40次循環,每一循環包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應。每一循環的產物作為下一個循環的模板。PCR的擴增效率很高,如果循環次數是30次,那么新生DNA片段理論上達到230拷貝(約為109個分子)。
  PCR反應每個循環的三個基本反應步驟如下:
  ①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA產物解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;
 ?、谀0錎NA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;
  ③引物的延伸:溫度升到72℃左右,DNA模板-引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。重復循環變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。到達平臺期(Plateau)所需循環次數取決于樣品中模板的拷貝。PCR技術的特異性取決于引物與模板結合的特異性。
  PCR擴增儀是利用PCR技術對特定基因做體外的大量合成,用于以檢測DNA/RNA為目的的各種基因分析。