本試劑盒采用自主研發的*裂解液和酶相結合的方法裂解材料,具有效率高、性能穩定、重復性高、速度快等特點。材料被裂解并、經蛋白酶K消化后,DNA在高鹽低pH的條件下,與硅基質膜特異性結合,在低鹽高pH值條件下,吸附的DNA被洗脫下來。本試劑盒適用于各種動物組織、動物細胞和血液基因組DNA的提取。提取的基因組DNA可以直接用作PCR模板、酶切、雜交等分子生物學實驗。
更新時間:2024-06-12
鼎國自產 動物組織 / 細胞 / 血液基因組 DNA 提取試劑盒 ;350元
純化效果檢測
取2-5μl得到的DNA產物,0.7%agarose電泳檢測DNA分子的完整性和紫外分光光度計檢測濃度和純度。
DNA在260nm處有吸收峰,檢測時應該使OD260值在0.1到1.0之間數值較準確。
OD260為1時大概相當于50μg/ml雙鏈DNA,40μg/ml單鏈DNA。
核酸濃度(μg/ml)=OD260×50×稀釋倍數。
OD260/OD280的值應該為1.7~2.0。
常見問題分析:
常見問題 | 可能原因 | 建議 |
柱子堵塞 | 裂解消化不充分 | 適當延長Proteinase K消化時間。 |
樣品過多 | 樣品量不要超過說明書所定zui大量;可適當增加Proteinase K的用量 | |
DNA產量低 | 將沉淀倒入柱子導致柱子堵塞 | 加大轉速和延長離心時間 |
Wash buffer A、Wash buffer B沒有加無水乙醇 | 按說明書加入無水乙醇 | |
洗脫效率低 | 洗脫液使用前于55-65℃預熱;洗脫液pH值不合適,應保證在7.5~8.5 | |
樣品裂解不* | 適當延長裂解時間。 | |
樣品不夠新鮮 | 盡量使用新鮮樣品 | |
DNA純度低 | 消化不* | 樣品量不要超過規定范圍;延長消化時間,使樣品充分消化 |
洗滌不當 | 嚴格按照說明書步驟洗脫 | |
乙醇未除干凈 | 適當延長晾干時間,使乙醇充分揮發 |
產品簡介:
本試劑盒采用自主研發的*裂解液和酶相結合的方法裂解材料,具有效率高、性能穩定、
重復性高、速度快等特點。材料被裂解并、經蛋白酶K消化后,DNA在高鹽低pH的條件下,
與硅基質膜特異性結合,在低鹽高pH值條件下,吸附的DNA被洗脫下來。
本試劑盒適用于各種動物組織、動物細胞和血液基因組DNA的提取。
提取的基因組DNA可以直接用作PCR模板、酶切、雜交等分子生物學實驗。
組成:
成分 | 50次 | 注意事項 |
RNase A | 0.5 ml | -20℃保存 |
Proteinase K | 0.5 ml | -20℃保存 |
Lysis Buffer A | 35 ml | 室溫低時可能有白色沉淀產生,加熱溶解即可 |
Lysis Buffer B | 25 ml | |
Wash buffer A | 27 ml | 用前加入18 ml 無水乙醇,充分混勻 |
Wash buffer B | 16 ml | 用前加入64 ml無水乙醇,充分混勻 |
Elution Buffer | 10 ml | |
離心柱 | 50個 | 單個zui大吸附量20 μg |
紅細胞裂解液 | 50ml | 4℃ |
可選試劑
編號 | 品名 | 規格 | 價格 |
NEP033 | 紅細胞裂解液 | 100ml | 40.00 |
實驗前試劑準備
Wash buffer A中加入18 ml 無水乙醇,充分混勻。
Wash buffer B中加入64 ml無水乙醇,充分混勻。
儲存條件: 請按照上表中注意事項的條件保存,其他未說明的可常溫或4度保存。
步驟:
1、樣品處理
全血:取50-300 μl全血,加入3倍體積的紅細胞裂解液,震蕩混勻,12000rpm離心1min,
去上清。加入600 μl Lysis Buffer A,震蕩混勻。
禽血:加入10-100 μl禽血,直接加入600 μl Lysis Buffer A,顛倒混勻。
動物組織:取20-50mg動物組織,液氮研磨或勻漿,加入100 μl PBS重懸樣品,
然后加入到準備好的600 μl Lysis Buffer A,振蕩混勻。
動物細胞:離心收集105-106個培養細胞,加入100 μl PBS重懸細胞,
加入600 μl Lysis Buffer A,震蕩混勻。
2、 加入10 μl Proteinase K,60 ℃水浴20 min~40 min,其間顛倒混勻數次。
如需消化RNA,可待樣品裂解*后加入10 μl RNase A,混勻,室溫放置10 min。
若加入樣品較多,可適當延長水浴時間,適量增加Proteinase K的量,按比例增加
Lysis Buffer A和Lysis Buffer B量。
3、 加入400 μl Lysis Buffer B,漩渦震蕩30 s。
4、 12,000 rpm離心5 min,將上清轉入離心柱中,靜置2 min。
上清可能出現少量白色漂浮物,此為未消化*的細胞和蛋白質。
5、 12,000 rpm離心1 min,棄廢液。
6、 加入700 μl Wash buffer A(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000 rpm離心 1min,棄廢液。
7、 加入700 μl Wash buffer B(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇), 12,000 rpm離 心 1min,棄廢液。
8、 加入500 μl Wash buffer B,12,000 rpm離心1 min,棄廢液。
9、 再次12,000 rpm離心2 min,將離心柱置于新的離心管中,并打開離心柱蓋,于室溫或37 ℃恒 溫箱放置5~10min,
直至無明顯乙醇味。
10、在硅基質膜中央加入50~200 μl Elution Buffer或雙蒸水(事先預熱55~65 ℃),置于室 溫2 min,12,000 rpm離2 min。
所得液體即為基因組DNA溶液。